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肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第4號）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門對注冊申報(bào)資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是對肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）屬于柔膜體綱，支原體屬，是引起兒童和成人呼吸道感染及社區(qū)獲得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）的常見病原體之一。MP感染廣泛存在于世界各地，平時(shí)散在性發(fā)病，每隔數(shù)年會(huì)出現(xiàn)地區(qū)周期性流行，每次流行持續(xù)數(shù)月到數(shù)年不等。對于群聚性發(fā)病或初始經(jīng)驗(yàn)性治療無效的CAP患者，住院或重癥CAP患者，建議進(jìn)行致病原檢查，明確CAP致病原可有助于進(jìn)行針對性抗感染治療。

肺炎支原體的檢測對于支原體肺炎的診斷至關(guān)重要，實(shí)驗(yàn)室檢測方法包括病原體培養(yǎng)、抗原檢測、抗體檢測和核酸檢測。肺炎支原體培養(yǎng)難度較大，需采用專門的培養(yǎng)基和培養(yǎng)技術(shù)，耗時(shí)長，但特異性高。血清特異性抗體檢測是目前輔助診斷肺炎支原體肺炎的重要手段，免疫層析法、酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法抗體檢測試劑在臨床中廣泛應(yīng)用。顆粒凝集（particle agglutination，PA）試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合（complement fixation，CF）試驗(yàn)是檢測肺炎支原體抗體的傳統(tǒng)方法，但是無法區(qū)分IgM和IgG。

本指導(dǎo)原則適用于采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法或化學(xué)發(fā)光法，體外定性檢測人血清、血漿或全血中的肺炎支原體IgM和/或IgG抗體的試劑。結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于肺炎支原體感染的輔助診斷。對基于其他方法學(xué)的試劑，及肺炎支原體其他抗體或總抗體檢測試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人可以參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價(jià)或補(bǔ)充其他的評價(jià)資料進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、主要研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。產(chǎn)品描述中應(yīng)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，選擇捕獲法或間接法的考慮。同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢測原理、特異性抗原等主要組成成分、樣本類型等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

（二）主要原材料的研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料一般包括抗原、抗體、對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品和企業(yè)參考品等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)的制備、鑒定和質(zhì)量控制過程，其制備工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、選定的供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商提供的原材料檢驗(yàn)報(bào)告（質(zhì)量證書），以及該原材料到貨后的入廠檢驗(yàn)報(bào)告，供應(yīng)商為原材料的生產(chǎn)商，不得隨意更換。申請人應(yīng)對各主要原材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1.肺炎支原體抗原

肺炎支原體抗原決定了檢測的敏感度和特異性，對抗體檢測試劑至關(guān)重要。應(yīng)注重抗原的選擇，詳細(xì)描述抗原的名稱，天然/重組表達(dá)信息及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來源、制備、純化、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

2.抗人IgM/IgG單克隆抗體

詳述抗體的選擇過程，提交抗體生物學(xué)來源、免疫原及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

3.質(zhì)控線/對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品

免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置質(zhì)控線，詳述質(zhì)控線相關(guān)原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗體）的選擇依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

對照品/質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。陽性對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇經(jīng)合理稀釋的臨床陽性樣本或人源化抗體，陰性對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來源、選擇和陰、陽性確認(rèn)等相關(guān)研究資料。企業(yè)應(yīng)對對照品/質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。

4.其他主要原輔料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原輔料，如膠體金、辣根過氧化物酶、吖啶酯、硝酸纖維素膜、微孔板、磁微粒、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，并提交相關(guān)資料。明確主要原輔料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應(yīng)介紹血細(xì)胞去除方式及相關(guān)原材料，并驗(yàn)證去除效果。

5.企業(yè)參考品

企業(yè)參考品是保證產(chǎn)品性能穩(wěn)定的重要構(gòu)成之一。應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。企業(yè)參考品的設(shè)置應(yīng)至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和重復(fù)性參考品。其中陽性參考品重在評估產(chǎn)品的包容性，應(yīng)選擇不同來源的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)可評價(jià)產(chǎn)品的特異性，建議包括含有類風(fēng)濕因子、其他病原體抗體等可能的干擾和交叉樣本，對于檢測肺炎支原體IgM抗體的試劑，陰性參考品中建議包括肺炎支原體IgG抗體陽性樣本。檢測限參考品可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含最低檢測限水平。重復(fù)性參考品可設(shè)置至少兩個(gè)水平的臨床陽性樣本,包括最低檢測限附近濃度。對于同時(shí)檢測肺炎支原體IgM和IgG抗體的試劑，企業(yè)參考品需對IgM抗體和IgG抗體分別設(shè)置。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

5.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、判讀時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設(shè)置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計(jì)中關(guān)于避免IgG影響IgM檢測結(jié)果的合理措施，盡量減少特異性IgG對IgM檢測造成的假陰性和假陽性。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑進(jìn)行的所有性能評估資料，包括具體研究方法、實(shí)驗(yàn)方案、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中進(jìn)行描述，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本類型和來源等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。肺炎支原體IgM和IgG抗體的性能應(yīng)分別研究。

1.企業(yè)參考品檢驗(yàn)

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.最低檢測限

建議采用已明確肺炎支原體抗體滴度的臨床陽性樣本，采用陰性樣本進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測限的建立和驗(yàn)證。應(yīng)采用合理方法確認(rèn)抗體類型和滴度，提供詳細(xì)的確認(rèn)方法及結(jié)果。

2.1選取至少3份臨床樣本，系列稀釋獲得多個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣品，每個(gè)濃度至少重復(fù)檢測20次，將具有95%陽性檢出率的最低濃度作為最低檢測限。

2.2選擇與2.1不同的3份臨床樣本，采用陰性基質(zhì)稀釋到最低檢測限濃度水平進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。

3.包容性

應(yīng)選擇中國境內(nèi)來源于不同時(shí)間、不同地域的多份臨床確診且經(jīng)合理方法確定肺炎支原體抗體陽性的患者樣本進(jìn)行檢測，建議覆蓋Ⅰ型和Ⅱ型兩個(gè)基因型，檢測結(jié)果應(yīng)與預(yù)期結(jié)果相符。驗(yàn)證用樣本的抗體水平應(yīng)接近檢測限濃度，可采用臨床陰性樣本進(jìn)行稀釋。

4.精密度

申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如變異系數(shù)的范圍或顯色強(qiáng)度等。應(yīng)對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括不同時(shí)間、地點(diǎn)、操作者、檢測輪次、試劑批次、適用儀器（如適用）等。

設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測。至少采用3個(gè)水平的臨床樣本進(jìn)行精密度評價(jià)，具體要求如下：

4.1 陰性樣本：待測物濃度低于最低檢測限或?yàn)榱銤舛?，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

4.2臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑的最低檢測限，陽性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

4.3中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%，變異系數(shù)（CV）應(yīng)在合理的可接受范圍內(nèi)（如適用）（n≥20）。

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)

應(yīng)對肺炎支原體的近緣微生物抗體，易引起相同或相似的臨床癥狀，及易合并感染的微生物抗體（表1）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。同時(shí)進(jìn)行高濃度肺炎支原體特異性IgG抗體和IgM抗體之間的交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價(jià)。例如采用大腸埃希菌作為宿主菌進(jìn)行重組抗原的表達(dá)，建議考慮大腸埃希菌抗體陽性樣本可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

交叉反應(yīng)用臨床樣本中相關(guān)病原體抗體滴度水平應(yīng)較高，并且抗體類型（IgM、IgG）應(yīng)與申報(bào)試劑檢測抗體類型一致。提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣本來源、陰陽性和滴度確認(rèn)等信息。

表1 用于交叉反應(yīng)研究的病原體抗體陽性血液樣本

注：＊項(xiàng)為選擇性驗(yàn)證

5.2干擾試驗(yàn)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）下，采用待測抗體為弱陽性和陰性水平的多例樣本進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)至少包括下列可能的干擾物質(zhì)。

5.2.1 內(nèi)源性干擾物質(zhì)：血紅蛋白、膽紅素、血脂、類風(fēng)濕因子、其他自身免疫性抗體，異嗜性抗體（如HAMA）、總IgG、總IgM、紅細(xì)胞壓積（全血樣本適用），高濃度肺炎支原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的干擾。

5.2.2常見治療性藥物：左氧氟沙星、莫西沙星、吉米沙星等喹諾酮類抗菌藥物，阿奇霉素、克拉霉素、紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，多西環(huán)素、米諾環(huán)素等四環(huán)素類抗菌藥物。

5.2.3 癥狀相關(guān)其他經(jīng)驗(yàn)性藥物。

5.2.4抗凝劑：如果試劑盒適用樣本類型包括血漿、全血樣本，可采用一定數(shù)量同源樣本通過比對試驗(yàn)的方法，驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

6. IgM抗體破壞試驗(yàn)

對于肺炎支原體IgM抗體檢測試劑，建議對至少5份含有肺炎支原體特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。

7.鉤狀（HOOK）效應(yīng)研究

須采用多份高滴度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度分別檢測，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。

8.其他需注意問題

對于使用儀器進(jìn)行結(jié)果判讀的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用機(jī)型】項(xiàng)中所有型號儀器的性能評估資料。

9.適用的樣本類型

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗(yàn)證樣本的可比性。如產(chǎn)品適用于靜脈全血，建議進(jìn)行最低檢測限和精密度研究，同時(shí)進(jìn)行同源比對試驗(yàn)。

（五）陽性判斷值確定資料

提交對申報(bào)試劑陰性/陽性結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off）確定資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人群及樣本選擇、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽性判斷值的樣本選擇應(yīng)考慮不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，納入陰性、陽性及臨界值附近的樣本。肺炎支原體IgM抗體陽性樣本，可采用急性期且顆粒凝集試驗(yàn)滴度1：160的樣本，或采用其他合理方法確定。如檢測結(jié)果為數(shù)值形式，建議采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）的分析方式來確定合理的陽性判斷值；如試驗(yàn)結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。

如產(chǎn)品適用多個(gè)樣本類型，應(yīng)明確不同的樣本類型是否存在差異，如無差異，可采用一個(gè)樣本類型進(jìn)行陽性判斷值確定后，對其他樣本類型進(jìn)行驗(yàn)證。如有差異，應(yīng)分別進(jìn)行陽性判斷值的確定。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

1.申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開瓶（開封）穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性（如涉及）、機(jī)載穩(wěn)定性（如涉及）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等研究。如果產(chǎn)品配套校準(zhǔn)品，還應(yīng)對校準(zhǔn)頻率進(jìn)行研究。申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

2.適用樣本的穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性?？衫鋬霰４娴臉颖具€應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

（七）臨床評價(jià)資料

開展臨床試驗(yàn)應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，選擇不少于3家（含3家）已備案且具備該產(chǎn)品臨床試驗(yàn)?zāi)芰Φ呐R床機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

2.臨床試驗(yàn)適用人群

申請人應(yīng)選擇體征/癥狀符合呼吸道感染的目標(biāo)人群，臨床試驗(yàn)的受試人群應(yīng)盡可能全面地代表預(yù)期人群。臨床上，學(xué)齡前、學(xué)齡兒童及青少年為肺炎支原體的易感人群，在進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意入組受試者代表性。建議受試者中易感人群比例不低于50%，且受試者年齡分布應(yīng)均衡。

3.臨床試驗(yàn)方法

臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對比試劑）進(jìn)行比較研究的方法，評價(jià)兩種方法檢測結(jié)果的一致性，評價(jià)指標(biāo)通常包括陽性符合率、陰性符合率等。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性?？紤]到試驗(yàn)用體外診斷試劑的預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)中陽性和陰性樣本均應(yīng)包括一定量的新鮮樣本。

體外診斷試劑的比較研究試驗(yàn)中應(yīng)對受試者樣本設(shè)盲，并使檢測順序隨機(jī)，以避免因操作者和檢測結(jié)果的評價(jià)者知曉受試者的疾病診斷或?qū)Ρ仍噭z測結(jié)果等信息而引入偏倚。對于結(jié)果不一致的樣本建議通過合理的方式進(jìn)行分析，分析方式包括不一致樣本的第三方試劑復(fù)測、與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性研究等。

對于肺炎支原體特異性IgM檢測試劑，申請人還應(yīng)對急性期患者樣本進(jìn)行試驗(yàn)用體外診斷試劑與急性期確認(rèn)參考方法的一致性研究，以評價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑的臨床靈敏度。選擇不少于30例處于感染急性期患者的樣本。急性期確認(rèn)參考方法一般包括：肺炎支原體特異性IgG抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動(dòng)態(tài)監(jiān)測2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與急性期比較IgG呈4倍以上升高），呼吸道樣本（咽拭子、痰液等）核酸檢測或分離培養(yǎng)等。

4.樣本類型

肺炎支原體抗體檢測試劑的樣本類型通常涉及血清、血漿及全血。臨床試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以其中一種樣本類型為主進(jìn)行臨床試驗(yàn)。其他樣本類型可通過同源樣本一致性比對方式進(jìn)行樣本類型適用性臨床驗(yàn)證。如血清與血漿樣本之間經(jīng)臨床前研究階段驗(yàn)證不存在性能差異，可以在各具有一定數(shù)量的前提下，通過合并統(tǒng)計(jì)的方式證明兩種樣本類型的適用性。

臨床樣本的采集、處理、保存等應(yīng)分別滿足臨床試驗(yàn)中所涉及各產(chǎn)品說明書相關(guān)要求。

5.樣本量

建議采用單組目標(biāo)值法估算臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通過陽性符合率計(jì)算所需陽性樣本的例數(shù)，通過陰性符合率計(jì)算所需陰性樣本的例數(shù)，同時(shí)考慮脫落情況，估算最低樣本總量。試驗(yàn)用體外診斷試劑所能達(dá)到的陽性符合率和陰性符合率預(yù)期值建議經(jīng)過小規(guī)模預(yù)試驗(yàn)獲得。根據(jù)現(xiàn)有認(rèn)知，建議陽性符合率目標(biāo)值設(shè)定不低于90%，陰性符合率目標(biāo)值設(shè)定不低于95%。當(dāng)符合率預(yù)期值遠(yuǎn)高于目標(biāo)值時(shí)，應(yīng)采用其他的方法進(jìn)行樣本量的估算。

6.臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案應(yīng)一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。同時(shí)，所制定的臨床試驗(yàn)方案應(yīng)符合所涉及各產(chǎn)品說明書的要求。

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)對臨床試驗(yàn)入組情況及數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)的描述及統(tǒng)計(jì)，建議對不同年齡段人群入組情況進(jìn)行說明。

選擇2×2列聯(lián)表的形式展示兩種試劑的定性檢測結(jié)果。計(jì)算陰性符合率、陽性符合率、總符合率及相應(yīng)的95%置信區(qū)間，同時(shí)需進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)。

8.臨床試驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法、必要的討論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復(fù)性、最低檢測限等。

按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，下文簡稱《辦法》）的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，肺炎支原體IgM/IgG抗體檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1．【預(yù)期用途】

1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿/全血樣本中的肺炎支原體IgM/IgG抗體。

1.2結(jié)合臨床和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，用于肺炎支原體感染的輔助診斷。

1.3臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡要介紹現(xiàn)有的肺炎支原體臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

2.1樣本采集：明確采集時(shí)間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

2.2干擾物的影響：明確常見干擾物對實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。

3.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

3.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

3.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

3.7特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。

4.【陽性判斷值】說明陽性判斷值，并簡要說明陽性判斷值確定的試驗(yàn)方法。如陽性判斷值（CO值）需進(jìn)行計(jì)算確定，詳細(xì)描述具體計(jì)算方法。

5.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控線/對照品/質(zhì)控品/校準(zhǔn)品以及樣本的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。對于膠體金法檢測試劑可采用圖示形式顯示檢測結(jié)果。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。

6.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，建議包括以下內(nèi)容：

6.1  本試劑盒的檢測結(jié)果不得作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、處理及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

6.3感染初期，抗體可能未產(chǎn)生或者產(chǎn)生水平低于產(chǎn)品最低檢測限，而產(chǎn)生陰性結(jié)果。檢測陰性不能排除急性感染，對于可疑的樣本建議進(jìn)行病原學(xué)檢測，或至少間隔7天再次檢測。

6.4評價(jià)血清學(xué)檢測結(jié)果時(shí)需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測的參考價(jià)值有限。

6.5在近幾個(gè)月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

6.6肺炎支原體IgG抗體在部分治愈患者體內(nèi)持續(xù)存在，短期內(nèi)再次感染的患者確診應(yīng)進(jìn)行肺炎支原體的抗體滴度動(dòng)態(tài)檢測或核酸定量檢測以進(jìn)行佐證。

7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：企業(yè)參考品符合率、最低檢測限、包容性、精密度、分析特異性（交叉反應(yīng)和干擾試驗(yàn)）、鉤狀（HOOK）效應(yīng)。介紹所用樣本背景信息、數(shù)量、濃度，評價(jià)方法及檢測結(jié)果。

8.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

8.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

1.《體外診斷試劑注冊管理辦法》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號），2014年7月30日

2.《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第16號），2014年9月11日.

3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號），2014年9月11日

4.《國家食品藥品監(jiān)督管理總局關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原國家食品藥品監(jiān)管總局公告2014年第44號），2014年9月5日

5.中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)臨床檢驗(yàn)學(xué)組，兒童肺炎支原體呼吸道感染實(shí)驗(yàn)室診斷中國專家共識(shí)，中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2019年7月第42卷第7期

6.中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)，中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版），中華結(jié)核和呼吸雜志，2016年4月第39卷第4期

7.陸權(quán)，陸敏. 肺炎支原體感染的流行病學(xué)[J]. 中華兒科雜志，2016，54（3）:196-197

8.中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)感染學(xué)組，成人肺炎支原體肺炎診治專家共識(shí)，中華結(jié)核和呼吸雜志，2010年9月第33卷第9期

四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。