遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)遺傳性耳聾相關(guān)基因突變檢測試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，也不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
耳聾是一種常見的感覺障礙性疾病，耳聾病因復(fù)雜，目前研究認(rèn)為約60％重度耳聾的發(fā)病與遺傳有關(guān)。遺傳性耳聾主要涉及四種遺傳方式：常染色體隱性、常染色體顯性、線粒體遺傳、性染色體連鎖遺傳。按耳聾和言語功能發(fā)育的關(guān)系可分為語前聾和語后聾。言語功能發(fā)育之前發(fā)生的重度或極重度耳聾稱為語前聾，在言語功能發(fā)育完成后開始的耳聾稱為語后聾。一般來說，常染色體隱性遺傳性耳聾表現(xiàn)為先天性聾或語前聾，常染色體顯性遺傳耳聾多表現(xiàn)為語后聾或漸進(jìn)性聽力下降。藥物性耳聾、大前庭水管綜合征等遺傳性耳聾也可表現(xiàn)為后天遲發(fā)性。遺傳性耳聾根據(jù)是否伴有多個(gè)系統(tǒng)病變分為綜合征型耳聾與非綜合征型耳聾，綜合征型耳聾一般除了聽力損傷外還伴有其他器官系統(tǒng)異常，表現(xiàn)為多種表型，與非綜合征型耳聾相比其遺傳背景更為復(fù)雜。目前遺傳性耳聾中約有30%為綜合征型耳聾，70%為非綜合征型耳聾。其中，非綜合征型常染色體隱性耳聾最常見，約占80%。
耳聾具有顯著的遺傳異質(zhì)性，不同的種族中常見的致聾基因不同，進(jìn)化過程造成了人種間遺傳差異、人群遷徙和血源融合又導(dǎo)致了局部地區(qū)人群遺傳背景的復(fù)雜化，中國耳聾人群中基因突變熱點(diǎn)、突變譜、表型與基因型對(duì)應(yīng)性與其他人種耳聾人群存在一定差異。在我國，約70%的遺傳性耳聾變異來自于GJB2、SLC26A4、GJB3及線粒體DNA 12SrRNA 等4個(gè)常見致聾基因。目前常規(guī)建議進(jìn)行的檢測位點(diǎn)主要涉及4個(gè)基因的9個(gè)突變位點(diǎn)，具體為GJB2基因：c.35delG、c.235delC、c.176-191dell6和c.299-300delAT；SLC26A4基因：c.2168A>G和c.919-2A>G（IVS7-2A>G）；GJB3基因：c.538C>T ；12SrRNA基因：m.1494C>T和m.1555A>G。各位點(diǎn)相關(guān)情況如下：
GJB 2基因： GJB2基因位于人類染色體13q11-12，其基因短小，包含2個(gè)外顯子，編碼226個(gè)氨基酸，編碼縫隙連接蛋白26，耳蝸縫隙連接蛋白的作用是維持內(nèi)耳鉀離子平衡，同時(shí)在內(nèi)耳的生理功能中發(fā)揮非常復(fù)雜的作用，包括參與第二信使的轉(zhuǎn)運(yùn)及耳蝸內(nèi)電位的產(chǎn)生。目前已發(fā)現(xiàn)的GJB2基因致聾突變超過200個(gè)，是迄今為止在多個(gè)人種中最常見的致聾基因，國外研究認(rèn)為常染色體隱性遺傳性耳聾患者中，約有50%由GJB2基因突變引起。但是該基因致聾比例在不同人種中存在差異。其主要突變方式為缺失，其中，c.235delC是中國人群中發(fā)生頻率最高的突變，其他位點(diǎn)還包括c.299-300delAT、c.176-191del16、c.35delG等。
SLC26A4基因：又稱PDS基因，位于人類染色體7q31,含有21個(gè)外顯子，編碼離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白，在機(jī)體離子成分平衡的維持中發(fā)揮重要作用。該基因突變是導(dǎo)致前庭水管擴(kuò)大（EVA）的責(zé)任基因，EVA是與兒童感音神經(jīng)性聾相關(guān)的最常見的內(nèi)耳畸形，大部分EVA患者變現(xiàn)為非綜合征型耳聾（DFNB4），少部分同時(shí)合并甲狀腺腫大，稱Pendred綜合征。對(duì)于該類患者往往變現(xiàn)為遲發(fā)性、漸進(jìn)性，頭部碰撞、感冒等會(huì)引起顱內(nèi)壓變化的活動(dòng)都可能會(huì)引起聽力下降。在我國，約96%的前庭水管擴(kuò)大患者由SLC26A4基因突變導(dǎo)致，中國耳聾人群中該基因突變檢出率為20.35%，目前發(fā)現(xiàn)的該基因致病突變眾多，突變位點(diǎn)及突變頻率存在地域和種族差異，在中國c.919-2A>G、c.2168A>G為攜帶頻率最高的SLC26A4基因熱點(diǎn)突變，其次還有c.1229C>T、c.1975G>C、c.1174A>T等。突變等位基因按外顯子排名由高到低為：外顯子7+8、外顯子10、外顯子19、外顯子17、外顯子15。發(fā)生在上述外顯子上突變約占90.61%。
GJB3基因：位于染色體1p35-p33，編碼縫隙連接蛋白31，是國內(nèi)發(fā)現(xiàn)、克隆并鑒定的第一個(gè)耳聾相關(guān)基因，可以引起常染色體顯性或者隱性遺傳。主要突變形式有c.538C>T的無義突變和c.547G>A的錯(cuò)義突變，其可能與語后高頻聽力下降相關(guān)，目前國外對(duì)GJB3基因突變引起耳聾的報(bào)道較少。
線粒體DNA（mtDNA）突變：mtDNA是存在于細(xì)胞質(zhì)中、獨(dú)立于核染色體的基因組，由于受精卵所含有的mtDNA來自于卵子的細(xì)胞質(zhì)，因此主要為母系遺傳。在細(xì)胞復(fù)制過程中mtDNA突變隨機(jī)分配，母親-子代突變比例可能差異較大，mtDNA存在狀態(tài)閾值，即只有突變型DNA達(dá)到一定負(fù)荷率或mtDNA功能缺陷到一定程度才會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)表型。由mtDNA突變而引起的耳聾包括綜合征型耳聾和非綜合征型耳聾，其中mtDNA 12SrRNA上的m.1555A>G、m.1494C>T突變是氨基糖苷類藥物致聾的易感位點(diǎn)，突變攜帶者對(duì)氨基糖甙類藥物異常敏感，低劑量使用該類藥物就可能會(huì)出現(xiàn)耳鳴，甚至嚴(yán)重的聽力下降。此外，其他mtDNA突變還可能引起綜合征型耳聾，例如母系遺傳糖尿病伴耳聾等。
除上述列舉的代表性基因突變外，至今已有眾多其他耳聾相關(guān)的致病基因被克隆或鑒定，但還有很多耳聾表型的致病基因不清楚。隨著科學(xué)發(fā)展，可能發(fā)現(xiàn)其他意義明確的耳聾表型相關(guān)基因和突變位點(diǎn)并應(yīng)用于臨床。
目前，遺傳性耳聾基因突變檢測在遺傳性耳聾的輔助診斷以及新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查等領(lǐng)域有重要意義。例如通過對(duì)具有耳聾癥狀和/或體征人群，以及其他需要進(jìn)行耳聾基因突變檢測的人群，如有耳聾家族史的人群等進(jìn)行耳聾基因突變的檢測可用于遺傳性耳聾的輔助診斷；對(duì)新生兒進(jìn)行遺傳性耳聾基因突變篩查，可作為常規(guī)物理聽力篩查的補(bǔ)充，特別是可發(fā)現(xiàn)常規(guī)物理聽力篩查無法檢出的藥物性致聾基因攜帶者和遲發(fā)性耳聾基因攜帶者，從而進(jìn)行早期干預(yù)和指導(dǎo)等。
遺傳性耳聾的診斷是一項(xiàng)復(fù)雜的工作，診斷流程包含常規(guī)診斷的病史采集、體格檢查、輔助檢查、對(duì)先證者及家系成員進(jìn)行家系分析和遺傳性檢測等。
結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈血或干血斑樣本中人基因組DNA的遺傳性耳聾基因突變，用于遺傳性耳聾的輔助診斷，或新生兒遺傳性耳聾相關(guān)基因突變的篩查，具體預(yù)期用途應(yīng)與產(chǎn)品臨床驗(yàn)證相對(duì)應(yīng)。
耳聾基因突變檢測方法眾多，國內(nèi)應(yīng)用較多的有高通量測序、飛行時(shí)間質(zhì)譜、限制性酶內(nèi)切法、熒光PCR法、微陣列芯片技術(shù)、PCR+導(dǎo)流雜交法等，其具體的檢測原理存在差異，目前以僅包含PCR擴(kuò)增反應(yīng)或后續(xù)結(jié)合探針雜交反應(yīng)進(jìn)行位點(diǎn)檢測的試劑盒較為常見，因此，本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求適用于主要基于PCR擴(kuò)增類（如熒光PCR法、微陣列芯片技術(shù)、PCR+導(dǎo)流雜交法）的檢測試劑，對(duì)于其他檢測技術(shù)（如PCR-質(zhì)譜、高通量測序），申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。
本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。
二、注冊(cè)申報(bào)資料要求
（一）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及國內(nèi)外同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：
1.應(yīng)明確檢測位點(diǎn)的臨床意義，尤其是對(duì)于新突變位點(diǎn)，應(yīng)提交關(guān)于新增位點(diǎn)的臨床意義的行業(yè)認(rèn)可證據(jù)（如國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)）及支持性文獻(xiàn)等，詳述位點(diǎn)導(dǎo)致耳聾作用機(jī)制、遺傳方式、突變后果、突變檢出率以及中國人群數(shù)據(jù)等。
如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，申請(qǐng)人應(yīng)提供該基因新突變位點(diǎn)與耳聾表型相關(guān)的遺傳學(xué)證據(jù)，包括但不限于：耳聾患者和正常人群的等位基因突變頻率、耳聾患者家系共分離、生物信息學(xué)分析、權(quán)威數(shù)據(jù)庫的信息等基于中國人群的充分的研究數(shù)據(jù)，以及基因突變和表型關(guān)系評(píng)估的資料，新突變位點(diǎn)應(yīng)具有明確致病性。
2.詳述檢測原理、引物探針與檢測位點(diǎn)對(duì)應(yīng)關(guān)系以及結(jié)果判斷等。
3.同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、檢測的突變類型以及臨床意義等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。
綜述資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（原總局令第5號(hào)，以下簡稱《辦法》）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原總局公告2014年第44號(hào)），以下簡稱《44號(hào)公告》的要求。
（二）主要原材料的研究資料
主要原材料研究資料包括主要反應(yīng)成分、對(duì)照品/質(zhì)控品及企業(yè)參考品的研究資料。
1.此類產(chǎn)品的主要反應(yīng)成分一般包括人基因組核酸提取/純化試劑、檢測所需引物、探針、酶、dNTPs以及雜交反應(yīng)過程（如適用）中涉及的其他主要原材料（如標(biāo)記用酶等）。申請(qǐng)人應(yīng)提交各組分試劑中涉及的全部主要原材料的來源、篩選研究過程、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)資料等。如為申請(qǐng)人自制，應(yīng)提交詳細(xì)制備方法及過程，并應(yīng)保證工藝相對(duì)穩(wěn)定；如為外購，應(yīng)注意明確原材料的供應(yīng)商，并應(yīng)提交供應(yīng)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。
1.1核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。
1.2引物、探針
申請(qǐng)人應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計(jì)原則、靶基因座位選擇，同時(shí)應(yīng)提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況，建議設(shè)計(jì)多套引物探針以供篩選，針對(duì)待測位點(diǎn)檢測準(zhǔn)確性、特異性等功能性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳設(shè)計(jì)，注意應(yīng)提交詳細(xì)的篩選過程研究數(shù)據(jù)及分析過程。
申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確性、純度（HPLC等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長（如適用），以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1.3酶
酶包括DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)各種酶的活性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具有熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。
1.4脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）
包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度等的驗(yàn)證資料，以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1.5雜交用其他主要原材料（如適用）
根據(jù)具體產(chǎn)品提交雜交反應(yīng)涉及的其他主要原材料的選擇及驗(yàn)證資料，例如標(biāo)記用酶/生物素、雜交液試劑中關(guān)鍵原料等，明確其來源及相應(yīng)的技術(shù)指標(biāo)要求。
2.對(duì)照品/質(zhì)控品
試劑盒應(yīng)根據(jù)檢測原理設(shè)置各種對(duì)照品（質(zhì)控品）、質(zhì)控探針（如適用）實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品整個(gè)反應(yīng)體系的有效監(jiān)控。對(duì)照品通常包含陽性對(duì)照、陰性和/或空白對(duì)照，其中陽性對(duì)照一般應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。對(duì)于PCR擴(kuò)增后需要采用探針雜交進(jìn)行位點(diǎn)檢測的試劑，還應(yīng)建立對(duì)雜交過程的質(zhì)控體系。
如該類產(chǎn)品所采用的方法學(xué)和檢驗(yàn)原理顯示：無論檢測何種樣本（野生型、雜合/異質(zhì)突變和純合/均質(zhì)突變），其反應(yīng)體系均可報(bào)出核酸序列結(jié)果，均可對(duì)檢測的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則無需另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)；否則，試劑盒應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)。
對(duì)照品可采用人基因組DNA、細(xì)胞系提取的基因組DNA或質(zhì)粒等。陰性/空白對(duì)照應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請(qǐng)人應(yīng)提供對(duì)照品來源、選擇、制備、基因序列確認(rèn)等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對(duì)其檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。質(zhì)控探針/點(diǎn)涉及的主要原材料參照前述1.2及1.5進(jìn)行。
3.企業(yè)參考品
企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請(qǐng)人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。
3.1陽性參考品：陽性參考品應(yīng)包含所有位點(diǎn)的突變型（至少包含雜合型），參考品建議采用臨床樣本、細(xì)胞系或臨床樣本提取的基因組DNA制備，需提交詳細(xì)的細(xì)胞系構(gòu)建資料，樣本應(yīng)明確其來源及型別確認(rèn)資料。
3.2陰性參考品：建議包括野生型臨床樣本，可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列（如有）以及檢測范圍外其他檢測位點(diǎn)。參考品樣本要求參照陽性參考品，如涉及納入檢測范圍外其他罕見型別也可采用質(zhì)粒。
3.3檢測限參考品：濃度水平可選擇最低檢測限附近水平，應(yīng)包含所有位點(diǎn)的突變型（至少包含雜合型），對(duì)于線粒體突變，還應(yīng)包含最低檢出異質(zhì)性比例。參考品樣本要求參照陽性參考品進(jìn)行。
3.4精密度參考品：建議至少包括低濃度水平的代表性的突變位點(diǎn)和突變類型（覆蓋所有突變基因型）。參考品樣本要求參照陽性參考品進(jìn)行。
（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料
主要生產(chǎn)工藝研究資料應(yīng)提交工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs濃度、緩沖液離子濃度等）及其分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）、雜交芯片/雜交膜的制備（如涉及）、雜交過程所需的雜交液、顯色液及相關(guān)緩沖液（如涉及）等工藝過程中各參數(shù)詳細(xì)的選擇及確認(rèn)依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
反應(yīng)體系研究資料應(yīng)提交反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、PCR反應(yīng)體系、雜交體系以及其他檢測過程中涉及的反應(yīng)條件/參數(shù)等的確定。如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過程進(jìn)行的研究資料。
同時(shí)反應(yīng)體系研究資料中應(yīng)提供可檢測的總核酸濃度范圍的研究/確認(rèn)資料。即建議申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可準(zhǔn)確檢出的人基因組DNA濃度上限進(jìn)行研究驗(yàn)證。
不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。
（四）分析性能評(píng)估資料
申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評(píng)估資料，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則。
如試劑用于不同適用機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評(píng)估。
1.適用的樣本類型
如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)采用合理方法對(duì)每種樣本類型及添加劑（如抗凝劑）進(jìn)行適用性的研究確認(rèn)。對(duì)于不同的樣本類型（如外周血和干血斑）應(yīng)分別提交相應(yīng)的分析性能評(píng)估資料。
2.核酸提取/純化性能
在進(jìn)行靶核酸檢測前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取/純化組分，申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的研究驗(yàn)證，并評(píng)價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。不同樣本類型應(yīng)分別進(jìn)行核酸提取/純化性能的研究驗(yàn)證。
3.檢測準(zhǔn)確性
應(yīng)采用臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致，應(yīng)包含所有位點(diǎn)突變型，至少包含雜合型樣本，盡量納入純合型樣本，對(duì)于線粒體突變，應(yīng)盡量納入異質(zhì)型。同時(shí)建議考察對(duì)復(fù)合突變樣本/人工構(gòu)建質(zhì)粒的檢出能力。
提供所有試驗(yàn)用樣本來源、型別確認(rèn)等試驗(yàn)資料。
4.最低檢出限
該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組DNA的濃度，如包含線粒體突變，還應(yīng)考察特定核酸濃度下的最低可檢出的突變比例（異質(zhì)性比例）。
最低檢測限確立：可采用常見突變類型的臨床樣本，對(duì)人基因組DNA樣本梯度稀釋，對(duì)每個(gè)濃度水平重復(fù)檢測3～5次，可通過以100%可檢出的最低濃度作為估計(jì)檢測限，然后在此濃度附近制備若干濃度梯度樣本，每個(gè)濃度至少重復(fù)20次檢測，將具有95%檢出率水平濃度作為最低檢測限。
最低檢出限的驗(yàn)證：應(yīng)對(duì)試劑盒涵蓋的所有的檢測位點(diǎn)進(jìn)行檢出能力的驗(yàn)證，至少包含所有位點(diǎn)雜合型臨床樣本。
對(duì)線粒體突變還應(yīng)考察研究特定核酸濃度下的最低突變比例（異質(zhì)性比例），研究時(shí)可采用均質(zhì)突變與野生型混合制備系列不同異質(zhì)性比例樣本，考察在各固定核酸濃度下不同異質(zhì)性比例的檢出情況，并確定出可滿足最低核酸濃度下可檢出的最低異質(zhì)性比例，應(yīng)至少包含20次重復(fù)檢測，達(dá)到95%的檢出率。
應(yīng)提供所有試驗(yàn)用樣本來源、型別及濃度（含異質(zhì)性比例）確定的方法等試驗(yàn)資料。
5.分析特異性
分析特異性受干擾和交叉反應(yīng)的影響。申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)樣本中常見的干擾物質(zhì)和可能引起交叉反應(yīng)的物質(zhì)進(jìn)行研究。
5.1交叉反應(yīng)：應(yīng)針對(duì)野生型、非人類基因組、核酸序列相近或具有同源性、以及其他易引起交叉反應(yīng)的突變類型序列（如待測位點(diǎn)附近的其他突變位點(diǎn)、其他耳聾基因等）進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。同時(shí)申請(qǐng)人還應(yīng)驗(yàn)證檢測范圍內(nèi)各基因及突變位點(diǎn)間的交叉干擾。申請(qǐng)人應(yīng)提交交叉反應(yīng)基因的選擇依據(jù)（如耳聾基因背景、發(fā)病情況），說明交叉反應(yīng)樣本的來源/制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。
5.2干擾試驗(yàn)：應(yīng)針對(duì)可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、膽固醇等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑、常用藥物干擾等。針對(duì)不同樣本類型，建議分別進(jìn)行相應(yīng)的干擾研究。
干擾試驗(yàn)可采用配對(duì)比對(duì)的方式，比較干擾樣本和不包含或含正常濃度水平干擾物樣本檢測結(jié)果間差異?？赏ㄟ^在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)干擾物質(zhì)對(duì)目標(biāo)序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。對(duì)于線粒體突變，建議考察最低異質(zhì)性比例下的干擾。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。
6.精密度
精密度評(píng)價(jià)應(yīng)至少包含野生型及常見代表性突變位點(diǎn)和突變類型（覆蓋所有突變基因）的臨床樣本。試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取/純化等步驟（如有）。此外，如產(chǎn)品包含多個(gè)反應(yīng)管，建議每個(gè)反應(yīng)管均應(yīng)進(jìn)行精密度研究。精密度評(píng)價(jià)需滿足如下要求：
6.1對(duì)可能影響檢測精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測輪次和試劑批次等。
6.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
6.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本建議包含最低檢出限水平和中/高濃度。最低檢測限水平下，檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）;中/高濃度水平下，檢出率應(yīng)≥100%（n≥20）。
6.4申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，精密度指標(biāo)可設(shè)置為CV等（如有）。
7.提供企業(yè)參考品驗(yàn)證資料：根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
（五）陽性判斷值確定資料
建議申請(qǐng)人采用一定量的臨床樣本，結(jié)合產(chǎn)品特性采用受試者工作曲線或其他合理方法對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)/臨界值進(jìn)行研究確認(rèn)。陽性判斷值研究應(yīng)涵蓋野生型和所有檢測位點(diǎn)的突變型（至少納入雜合型）。同時(shí)應(yīng)提供內(nèi)標(biāo)（如適用）的研究資料。
對(duì)于某些檢測方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請(qǐng)人應(yīng)說明理由。
應(yīng)提交詳細(xì)的研究方案（包含臨床樣本的來源、型別確認(rèn)等資料）、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析過程。
（六）穩(wěn)定性研究資料
穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報(bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存時(shí)間等的研究。如核酸提取液可保存，還需對(duì)核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。
實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究應(yīng)采用至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下選取多個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)品性能評(píng)價(jià)，應(yīng)持續(xù)進(jìn)行至成品有效期后，從而確定產(chǎn)品保存條件和有效期。
（七）臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。
1．針對(duì)“遺傳性耳聾的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途
1.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員
申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。
1.2臨床試驗(yàn)適用人群和樣本類型
具有耳聾癥狀和/或體征人群，以及其他需要進(jìn)行耳聾基因突變檢測的人群，如有耳聾家族史的人群等。
臨床試驗(yàn)所用樣本一般為抗凝外周血樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)分別滿足申報(bào)試劑說明書、對(duì)比試劑說明書（如適用）及第三方試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。
如申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型包括抗凝外周血以外的其他樣本，如干血斑，請(qǐng)確認(rèn)該樣本類型的預(yù)期用途是否為遺傳性耳聾的輔助診斷，入組人群是否與其預(yù)期用途一致；如不同，則應(yīng)選擇其適用人群進(jìn)行相應(yīng)預(yù)期用途的臨床試驗(yàn)。
1.3臨床試驗(yàn)方法
1.3.1已有同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品
對(duì)于已批準(zhǔn)的遺傳性耳聾相關(guān)基因突變位點(diǎn)，原則上應(yīng)選擇已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，對(duì)比試劑應(yīng)涵蓋考核試劑的檢測位點(diǎn)，以此評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床檢測性能。
1.3.2無同類產(chǎn)品上市的申報(bào)產(chǎn)品
1.3.2.1如新突變位點(diǎn)的臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可（如：國內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)），且上述認(rèn)可基于充分的中國人群的臨床研究數(shù)據(jù)，則臨床試驗(yàn)可選擇參考方法（如一代測序法）作為對(duì)比方法，評(píng)價(jià)新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能。除此之外，還應(yīng)提交新位點(diǎn)臨床意義已獲行業(yè)認(rèn)可的相關(guān)證據(jù)，該部分資料可在其他臨床證據(jù)中提交。
1.3.2.2如新突變位點(diǎn)的臨床意義未獲行業(yè)認(rèn)可，申請(qǐng)人首先應(yīng)提供該基因新突變位點(diǎn)與耳聾表型相關(guān)的遺傳學(xué)證據(jù)，包括但不限于：耳聾患者和正常人群的等位基因突變頻率、耳聾患者家系共分離、生物信息學(xué)分析、權(quán)威數(shù)據(jù)庫的信息等基于中國人群的充分的研究數(shù)據(jù)，對(duì)基因突變和表型的關(guān)系進(jìn)行評(píng)估，具有明確致病性的基因突變位點(diǎn)方可納入。
臨床試驗(yàn)應(yīng)包括兩個(gè)目的，新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評(píng)價(jià)和臨床意義評(píng)價(jià)。新突變位點(diǎn)的臨床檢測性能評(píng)價(jià)可參考1.3.2.1；新突變位點(diǎn)的臨床意義評(píng)價(jià)應(yīng)分析基因型與臨床表型的相關(guān)性，基因型與表型的相關(guān)性可通過隨訪或其他臨床驗(yàn)證資料來證明。建議同時(shí)對(duì)所檢出攜帶新突變位點(diǎn)的耳聾患者進(jìn)行家系分析。
1.4最低樣本量和陽性例數(shù)
臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計(jì)方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。
臨床檢測性能評(píng)價(jià)的樣本量估算可分為以下幾種情況。
建議采用單組目標(biāo)值法分別估算臨床試驗(yàn)的最低樣本量，通過陽性符合率和陰性符合率來分別計(jì)算所需陽性樣本和陰性樣本的例數(shù)，同時(shí)考慮脫落情況，估算最低樣本總量。陽性符合率和陰性符合率的目標(biāo)值（臨床可接受的最低標(biāo)準(zhǔn)）建議均不低于95%。
對(duì)于常見突變位點(diǎn)，其陽性總例數(shù)應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，建議納入一定的純合突變（如GJB2的c.235delC、SLC26A4的c.919-2A>G等）。
對(duì)于罕見突變位點(diǎn)，陽性樣本也應(yīng)有一定的例數(shù)。
對(duì)于同時(shí)申報(bào)外周血與干血斑兩種樣本類型的產(chǎn)品，其臨床試驗(yàn)每種樣本類型應(yīng)單獨(dú)統(tǒng)計(jì)，滿足上述要求。
2.針對(duì)“新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查”預(yù)期用途
針對(duì)上述預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則基于目前的認(rèn)知水平進(jìn)行了闡述，不盡之處申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，充分考慮申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能研究需求，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)并進(jìn)行評(píng)價(jià)。
申請(qǐng)?jiān)擃A(yù)期用途的申報(bào)產(chǎn)品，其檢測的基因及突變位點(diǎn)，均應(yīng)為已得到行業(yè)內(nèi)公認(rèn)的、與遺傳性耳聾具有明確致病性關(guān)系的基因位點(diǎn)。新生兒遺傳性耳聾基因突變篩查用途的應(yīng)用應(yīng)符合國家及地方衛(wèi)生管理部門的相關(guān)規(guī)定。
2.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)和人員
應(yīng)選擇至少3家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)盡量考慮擬申報(bào)產(chǎn)品的特點(diǎn)和預(yù)期用途選擇具有相關(guān)資質(zhì)的機(jī)構(gòu)（各地衛(wèi)生健康部門指定的進(jìn)行新生兒耳聾基因篩查的臨床機(jī)構(gòu)）。建議選擇不同地區(qū)的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，且臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有相關(guān)檢測的優(yōu)勢。操作人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)的培訓(xùn)，并能熟練操作實(shí)驗(yàn)。機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》及其他相關(guān)規(guī)定。試驗(yàn)應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
2.2臨床試驗(yàn)適用人群和臨床樣本
如預(yù)期用途為新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查，則適用人群為新生兒。
臨床試驗(yàn)所用樣本一般為干血斑樣本。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)符合國家衛(wèi)生健康委員會(huì)等相關(guān)文件的要求，并滿足產(chǎn)品說明書的要求。
2.3最低樣本量和陽性例數(shù)
臨床試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)選擇合適的統(tǒng)計(jì)學(xué)模型同時(shí)結(jié)合適用人群基因突變頻率進(jìn)行樣本量估算，并在臨床試驗(yàn)方案中明確樣本量確定的依據(jù)。
根據(jù)臨床發(fā)病率、臨床診治情況及其他因素綜合考慮，對(duì)于我國相對(duì)常見的遺傳性耳聾突變位點(diǎn)，如GJB2的c.235delC、c.299_300delAT、c.176-191del16，SLC26A4的c.919-2A>G、c.2168A>G、線粒體DNA 12S rRNA的m.1555A>G突變等，應(yīng)通過前瞻性臨床試驗(yàn)檢出突變病例，總例數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求；其他人群突變率相對(duì)更低的突變位點(diǎn)也應(yīng)盡可能在前瞻性臨床試驗(yàn)中檢出。
2.4臨床試驗(yàn)方法
建議臨床試驗(yàn)采取前瞻性入組病例的形式，考核試劑對(duì)所有入組病例進(jìn)行檢測，病例基因變異狀態(tài)采用臨床參考標(biāo)準(zhǔn)（如：一代測序法）進(jìn)行確認(rèn)，評(píng)價(jià)考核試劑的臨床性能。臨床試驗(yàn)過程中，對(duì)于先天性耳聾患者等，應(yīng)提供病例的臨床診斷結(jié)果，臨床診斷結(jié)果應(yīng)有充分的依據(jù)，如采用現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識(shí)等。
申請(qǐng)人還應(yīng)同時(shí)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品或參考方法作為對(duì)比試劑，與考核試劑進(jìn)行一定例數(shù)的比較研究試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)考核試劑的臨床準(zhǔn)確性。此部分驗(yàn)證位點(diǎn)應(yīng)涵蓋申報(bào)產(chǎn)品的所有突變位點(diǎn)。此部分研究可使用部分已確診（回顧性）的陽性病例進(jìn)行研究。應(yīng)在試驗(yàn)方案和報(bào)告中對(duì)病例選擇的方式和原因進(jìn)行明確的說明。
應(yīng)針對(duì)篩查用途的驗(yàn)證和準(zhǔn)確性驗(yàn)證，分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
3.如有其他預(yù)期用途，也應(yīng)設(shè)計(jì)科學(xué)的臨床試驗(yàn)，提供充分的證據(jù)，證明其預(yù)期用途。
4.不同預(yù)期用途的通用要求
4.1臨床試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析
4.1.1應(yīng)在臨床試驗(yàn)方案或報(bào)告中明確申報(bào)產(chǎn)品、對(duì)比試劑和第三方試劑的試驗(yàn)方法。
4.1.2臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表應(yīng)以列表方式表示，包括申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果、對(duì)比試劑的結(jié)果、第三方試劑的檢測結(jié)果（如有）、年齡、性別、臨床診斷以及臨床背景信息（新生兒篩查應(yīng)提供新生兒聽力篩查結(jié)果。用于輔助診斷時(shí)，具有耳聾癥狀和/或體征的人群應(yīng)提供必要的聽力學(xué)及影像學(xué)檢查結(jié)果：如聲導(dǎo)抗、ABR和DPOAE，必要時(shí)提供CT或MRI結(jié)果）。
4.1.3以四格表分別總結(jié)考核試劑與對(duì)比試劑/方法的定性檢測結(jié)果，選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。除總體統(tǒng)計(jì)外，還要針對(duì)每一個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)純合突變以及雜合突變（或均質(zhì)突變和異質(zhì)突變）應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以驗(yàn)證考核試劑與對(duì)比試劑/方法檢測結(jié)果的一致性。
4.1.4結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證
在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對(duì)差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。
4.2臨床試驗(yàn)方案
各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案制定應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由該實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，申報(bào)產(chǎn)品的樣本類型不應(yīng)超越對(duì)比試劑/方法對(duì)樣本類型的要求。
4.3臨床試驗(yàn)報(bào)告
應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。
4.4其他
如申報(bào)產(chǎn)品可適用《用于罕見病防治醫(yī)療器械注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，則具體要求可參照該指導(dǎo)原則。
（八）產(chǎn)品技術(shù)要求
產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》、《44號(hào)公告》和《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)要求。該類產(chǎn)品作為三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求等內(nèi)容作為附錄附于技術(shù)要求正文后。
如有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告
根據(jù)《辦法》的要求，第三類體外診斷試劑申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)應(yīng)提交連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)報(bào)告。如有適用的國家參考品發(fā)布，產(chǎn)品檢驗(yàn)應(yīng)滿足國家參考品的要求。
（十）產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品說明書應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對(duì)該類產(chǎn)品說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。
1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測人XX樣本基因組DNA中的遺傳性耳聾基因XX（列舉具體的檢測基因及位點(diǎn)）突變。
1.2本產(chǎn)品用于遺傳性耳聾的輔助診斷。檢測結(jié)果僅代表對(duì)患者的遺傳性耳聾相關(guān)基因位點(diǎn)的檢測，僅供臨床醫(yī)生參考，不能作為診斷遺傳性耳聾的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者其他診斷信息對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
如用于新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查，預(yù)期用途可表述為：本產(chǎn)品可用于新生兒遺傳性耳聾基因突變的篩查。其檢測結(jié)果僅代表對(duì)新生兒的遺傳性耳聾相關(guān)基因位點(diǎn)的檢測，關(guān)于新生兒遺傳性耳聾的診斷，應(yīng)依據(jù)相關(guān)的診療流程。
1.3介紹耳聾相關(guān)的臨床背景信息及實(shí)驗(yàn)室診斷方法等，介紹被測靶標(biāo)（突變位點(diǎn)）的相關(guān)情況，說明各檢測位點(diǎn)的臨床意義。
2.【檢驗(yàn)原理】
對(duì)試劑盒的技術(shù)原理進(jìn)行詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。對(duì)試劑盒所用探針、引物及突變的判定等進(jìn)行詳細(xì)描述，對(duì)不同樣本反應(yīng)管組合（如涉及）、雜交芯片/雜交膜設(shè)計(jì)（如涉及）、對(duì)照品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測原理等進(jìn)行說明。
3.【主要組成成分】
3.1說明試劑盒包含組分的名稱或數(shù)量等信息，說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。
3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱及其他相關(guān)信息。
3.3如果試劑盒中不包含用于核酸提取純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)過驗(yàn)證后配合使用的商品化核酸提取純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及醫(yī)療器械備案號(hào)等詳細(xì)信息。
4.【儲(chǔ)存條件及有效期】
說明試劑盒的效期穩(wěn)定性等，應(yīng)明確具體的儲(chǔ)存條件及有效期等信息。明確開瓶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制等內(nèi)容。
5.【樣本要求】
樣本的采集、處理、檢測要求、運(yùn)送和保存：明確樣本采集、核酸提取純化方法、DNA純度及濃度/濃度范圍要求、樣本及核酸提取液的保存要求，包括具體的保存條件及期限等。
6.【適用儀器】
明確經(jīng)驗(yàn)證的所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。
7.【檢驗(yàn)方法】
詳細(xì)說明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：
7.1實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。
7.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。
7.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對(duì)核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)控，應(yīng)注意需明確提取核酸的濃度及純度等質(zhì)量要求。
7.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。
7.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。
7.6雜交及顯色體系（如涉及）中各步驟所涉及的反應(yīng)時(shí)間、溫度儀器設(shè)置及其他步驟參數(shù)。
7.7最終檢測及結(jié)果判讀過程。
8.【陽性判斷值】
簡要概述陽性判斷值具體判斷標(biāo)準(zhǔn)及研究驗(yàn)證情況。
9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
結(jié)合對(duì)照品、樣本管/雜交芯片/雜交膜（如涉及）檢測結(jié)果以及檢測類型，以列表/圖片形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。如存在檢測灰區(qū)，應(yīng)詳述對(duì)于灰區(qū)結(jié)果的處理方式。
10.【檢驗(yàn)方法的局限性】
10.1申報(bào)產(chǎn)品僅對(duì)下述突變位點(diǎn)和突變類型XX進(jìn)行了驗(yàn)證。
10.2有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析
10.2.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
10.2.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。
10.3該產(chǎn)品不能涵蓋與遺傳性耳聾相關(guān)的全部位點(diǎn)，未檢出突變不能排除攜帶其他突變位點(diǎn)。
11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】根據(jù)分析性能研究資料，編寫概述以下性能指標(biāo)：
11.1對(duì)相應(yīng)國家參考品（如有）檢測的符合情況。
11.2準(zhǔn)確性：簡述研究用樣本、試驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)結(jié)果。
11.3最低檢測限：簡單介紹最低檢測限的確定方法，并明確最低檢測限結(jié)果，包括線粒體突變最低檢出異質(zhì)性比例。
11.4精密度：簡單介紹精密度的確定方法，并明確精密度結(jié)果。
11.5分析特異性
11.5.1交叉反應(yīng)驗(yàn)證：交叉反應(yīng)驗(yàn)證情況。
11.5.2干擾物質(zhì)驗(yàn)證：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測結(jié)果的影響。
11.6企業(yè)內(nèi)部參考品符合率。
11.7臨床試驗(yàn)：簡要介紹臨床試驗(yàn)樣本、試驗(yàn)方法、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。
12.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。
12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》現(xiàn)行有效版本等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。
三、起草單位
國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。