2020年1月9日，國家藥監(jiān)局發(fā)布公告，對《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見稿）》面向公眾公開征求意見，這個(gè)指導(dǎo)原則，對無菌醫(yī)療器械注冊產(chǎn)品有重大影響。
引言：2020年1月9日，國家藥監(jiān)局發(fā)布公告，對《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見稿）》面向公眾公開征求意見，這個(gè)指導(dǎo)原則，對無菌醫(yī)療器械注冊產(chǎn)品有重大影響。
各有關(guān)單位：
為規(guī)范同種異體植入性醫(yī)療器械注冊申報(bào)中病毒滅活工藝驗(yàn)證相關(guān)資料，根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局2019年度醫(yī)療器械注冊技術(shù)指導(dǎo)原則制修訂計(jì)劃的有關(guān)要求，我中心組織起草了《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見稿）》。經(jīng)調(diào)研討論，形成征求意見稿。
為使該指導(dǎo)原則更具有科學(xué)合理性及實(shí)際可操作性，即日起在我中心網(wǎng)上公開征求意見，衷心希望相關(guān)領(lǐng)域的專家、學(xué)者、管理者及從業(yè)人員提出意見或建議，推動指導(dǎo)原則的豐富和完善。
請將意見或建議以電子郵件的形式于2020年2月7日前反饋我中心。
聯(lián)系人：孫嘉懌、李曉云
電話： 010-86452810、010-86452822
電子郵箱：sunjy@cmde.org.cn，lixy@cmde.org.cn
附件：1.同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）（征求意見稿）（下載）
2.意見反饋表（下載）
國家藥品監(jiān)督管理局
醫(yī)療器械技術(shù)審評中心
2020年1月9日
同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年修訂）
一、前言
同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來源組織為原料經(jīng)加工或組成的產(chǎn)品。
我國目前對同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測血清中的病毒核酸。但是，盡管對供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)，以及生產(chǎn)過程中帶入外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中采用有效的病毒滅活工藝，并對病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗(yàn)證。
本指導(dǎo)原則是對同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審評人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時(shí)的調(diào)整。
本指導(dǎo)原則為2011年發(fā)布的《同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗(yàn)證技術(shù)審查指導(dǎo)原則》的修訂版。主要修訂內(nèi)容包括：修改指導(dǎo)原則中相關(guān)語言描述；完善指示病毒類型及舉例的相關(guān)描述；調(diào)整病毒滅活/去除有效性驗(yàn)證的原則。
二、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于需要對生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗(yàn)證的同種異體植入性醫(yī)療器械。
三、基本要求
（一）常用的病毒滅活方法
同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活有多種方法，企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。采用病毒滅活工藝應(yīng)綜合考慮以下問題，包括病毒滅活效果的驗(yàn)證；病毒滅活工藝對產(chǎn)品性能的影響；病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。常用的病毒滅活方法舉例如下：
1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）
巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，是國內(nèi)外公認(rèn)的病毒滅活方法。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運(yùn)用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時(shí)間。
2.干熱滅活法
干熱滅活法主要用于凍干制品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已為實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證和臨床應(yīng)用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。干熱滅活法的優(yōu)勢是可用于凍干后的同種異體植入性醫(yī)療器械。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮溫度分布的均一性、凍干工藝和產(chǎn)品水分殘留量等。
3.γ射線輻照滅活法
γ射線輻照滅活法的主要優(yōu)點(diǎn)包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無有害物質(zhì)殘留、無明顯溫度升高等。該方法主要通過破壞核酸而滅活病毒。由于病毒在不同介質(zhì)中對射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時(shí)，應(yīng)去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量。采用該方法時(shí)應(yīng)考慮輻照劑量的分布和滅活時(shí)間。
4.過氧乙酸-乙醇滅活法
過氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。過氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒（PV）、HIV、偽狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細(xì)小病毒（PPV）等多種病毒，其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)所證實(shí)。采用該方法時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制產(chǎn)品過氧乙酸殘留量。
5.乙醇滅活法
乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時(shí)，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分，應(yīng)采用浸泡處理，采用該方法時(shí)應(yīng)考慮乙醇濃度和滅活時(shí)間。
（二）病毒滅活工藝的驗(yàn)證
1.指示病毒的選擇
應(yīng)選擇可能污染的病毒，或理化性質(zhì)相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無包膜等方面應(yīng)具有代表性，應(yīng)包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，應(yīng)至少選擇四類指示病毒，包括有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒，可參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應(yīng)包括HIV和HAV、HBV、HCV的指示病毒
表1 可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及
可選用的指示病毒（舉例）
病毒 | 基因組 | 包膜 | 大小（nm） | 指示病毒舉例 |
HIV | RNA | 有 | 80-100 | HIV |
HAV | RNA | 無 | 20 | Polio病毒、EMCV |
HBV | DNA | 有 | 45 | DHBV、PRV |
HCV | RNA | 有 | 40-60 | BVDV、Sindbis病毒 |
B19 | DNA | 無 | 20 | CPV、PPV |
注：DHBV：鴨乙型肝炎病毒；CPV：犬細(xì)小病毒。
2.染毒方法
由于同種異體植入性醫(yī)療器械多為固體形態(tài)，應(yīng)盡量模擬植入材料的病毒負(fù)載方式，同時(shí)考慮材料的結(jié)構(gòu)、尺寸和致密性，以及病毒在材料中的分布情況，建議采用浸泡法染毒（若適用）。病毒滅活零時(shí)的滴度應(yīng)至少≥106/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點(diǎn)，選擇合適的浸泡溫度、時(shí)間及其他條件。
3.方案設(shè)計(jì)
（1）試驗(yàn)分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對照組，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議至少包括細(xì)胞空白對照組、病毒對照組、樣品細(xì)胞毒性對照組或滴定前進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)、病毒滅活方法終止對照組及試驗(yàn)組。其中，病毒對照組的滴度是計(jì)算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實(shí)其病毒的零時(shí)滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果對照組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對照組相當(dāng)或接近，以證實(shí)病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時(shí)間終止作用。試驗(yàn)組至少應(yīng)有適宜的時(shí)間點(diǎn)（包括零時(shí)），以闡明病毒滅活的動力學(xué)，包括滅活動力學(xué)曲線。
（2）觀察指標(biāo)：
①滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。
②病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。
（3）病毒滅活效果的判定
應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。
①所選擇的病毒是否適宜，驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。
②病毒滴度降低量：病毒滅活零時(shí)的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過與病毒滅活后測定的殘留病毒量的比較，計(jì)算出該方法實(shí)際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如因檢測方法的靈敏度造成檢測出的病毒降低系數(shù)接近但小于4 logs時(shí)，應(yīng)盲傳三代，如無病毒檢出，亦可認(rèn)為是有效地去除/滅活病毒步驟。病毒去除/滅活有效性驗(yàn)證的目的是為了確定生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒的能力，因此需獲得生產(chǎn)全過程中估計(jì)去除/滅活病毒的總降低量。一般每種指示病毒的總降低量為各步驟降低數(shù)量的總和。但是由于驗(yàn)證方法的局限性，如分步驟中指示病毒降低量≤1 log，則不宜將其計(jì)算在總量中。
③病毒滅活動力學(xué)：病毒滅活通常不是簡單的一級反應(yīng)，評價(jià)驗(yàn)證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時(shí)也要考慮病毒滅活動力學(xué)。需以作圖的形式報(bào)告滅活動力學(xué)驗(yàn)證結(jié)果。如果指示病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，則說明此方法滅活病毒效果較好；如果指示病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時(shí)才達(dá)到最低檢出限度值，則不能認(rèn)為是一個(gè)有效的病毒滅活方法，或者殘留的指示病毒對該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。
4.病毒滅活工藝驗(yàn)證原則
（1）若申請人采用一個(gè)病毒滅活工藝，應(yīng)同時(shí)對有包膜RNA病毒、有包膜DNA病毒、無包膜RNA病毒、無包膜DNA病毒等四類病毒或其指示病毒（參見表1）的滅活效果均達(dá)到4logs以上，可認(rèn)為是有效病毒滅活工藝。
（2）若申請人采用一個(gè)病毒滅活工藝，無法滿足（1）的要求，建議申請人生產(chǎn)過程中采用兩種（或兩種以上）不同滅活原理的病毒滅活工藝，并分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證，保證每個(gè)病毒有至少一個(gè)滅活工藝可使其滅活效果達(dá)到4logs以上。
（3）若采用的病毒滅活/去除工藝將導(dǎo)致醫(yī)療器械產(chǎn)生不可接受的性能改變，則需要根據(jù)產(chǎn)品來源、采集及過程控制情況以及對患者的風(fēng)險(xiǎn)/受益分析來判斷其可接受性，但其單一去除/滅活病毒步驟的降低系數(shù)仍需達(dá)到4 logs以上。
5．舉例說明病毒滅活效果的判斷
（1）初始病毒負(fù)載率為6 logs ，檢測到剩余病毒量為4 logs，則該病毒滅活工藝不是有效工藝，只能說明具有一定的病毒滅活作用。
（2）初始病毒負(fù)載量為6 logs ，但由于產(chǎn)品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測靈敏度限值為4 logs ，僅能證明滅活2 logs 的病毒。此種情況需改變試驗(yàn)設(shè)計(jì)重新進(jìn)行驗(yàn)證，或者應(yīng)盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。
（3）初始病毒負(fù)載率為6 logs ，但仍可檢測到2 logs 的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)，并不受工藝的影響，應(yīng)認(rèn)為是有效的滅活病毒的方法。
（4）初始病毒負(fù)載量為6 logs ，之后未檢測出病毒。但是由于檢測靈敏度限值為2 logs ，僅能認(rèn)為大約滅活了4 logs 病毒。事實(shí)上可能等于或大于4 logs ，因此應(yīng)判定此方法清除的病毒量≥4 logs。
6．其他需考慮的問題
（1）病毒滅活驗(yàn)證研究應(yīng)在具有相應(yīng)資質(zhì)的單位完成。
（2）如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響。
（3）模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實(shí)際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒滅活效果的影響。
（4）病毒滅活工藝對不同類型病毒滅活的選擇性。
（三）病毒滅活工藝的再驗(yàn)證
生產(chǎn)過程發(fā)生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時(shí)；被滅活前產(chǎn)品的組成或pH值發(fā)生改變時(shí)，均需對病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗(yàn)證。
四、名詞解釋
1．同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。
2．植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：
－ 全部導(dǎo)入人體；
－ 替代上皮表面或眼表面；
通過外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認(rèn)作是植入性器械。
3．病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。
五、參考文獻(xiàn)
1．《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注〔2002〕160號）
2．《消毒技術(shù)規(guī)范》衛(wèi)生部2002版
3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》